产品组成	规格	使用说明
溶液1-蛋白酶K	1 mL
溶液2	22 mL
溶液3	10 mL	使用加入15mL无水乙醇
溶液4	5 mL	使用加入20mL无水乙醇
溶液5	4 mL
DNA吸附柱	50支
收集管2mL	50支
离心管 1.5mL	50支

注意事项

　　1. 溶液3在使用需加入15mL无水乙醇并充分混匀。

　　2. 溶液4在使用需加入20mL无水乙醇并充分混匀。

　　3. 需自备若干离心管，本试剂盒提供的50支1.5mL离心管仅用于收集终提取的DNA溶液。

　　4. 以下操作如非指明，均在室温下进行。

　　5. 本试剂盒赠送1支15mL的量取乙醇用管，所有使用无水乙醇的步骤均可用95%以上的医用酒精替代。

　　6. 离心机于8000 rpm运行时，离心力应大于1400g;使用掌上离心机时，需将离心时间延长至1min。

操作流程

　　1. 全血、血清样本：在1.5mL离心管中加入200μL样本。

　　拭子样本：将1个拭子置于离心管中，加入400μL无菌生理盐水，充分涡旋后，取200μL溶液置于1.5mL离心管中。

　　2. 加入20μL蛋白酶K，涡旋或颠倒混合均匀，56℃孵育10min。(无加热设备的情况下可于室温静置孵育15min)

　　3. 加入400μL溶液2，涡旋或颠倒混合均匀，56℃孵育5min。(无加热设备的情况下可于室温静置孵育5min)

　　注意：当样本为全血时，静置5min后请于12000rpm离心2min，吸取上清至另一离心管。不产生沉淀的血清和拭子样本可省略离心步骤。

　　4. 加入200μL无水乙醇，涡旋或颠倒混合均匀。

　　5. 将DNA吸附柱置于收集管中，将上述溶液全部转移到DNA吸附柱中，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　6. 向DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液3，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　注意：初次使用需向溶液3瓶中加入15mL的无水乙醇，并充分振荡混匀。

　　7. 将DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液4，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　注意：初次使用需向溶液4瓶中加入20mL的无水乙醇，并充分振荡混匀。

　　8. 将DNA吸附柱重新放回收集管中，8,000 rpm空转离心30s，弃滤液。将吸附柱打开置于室温5分钟，以晾干。

　　注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

　　9. 将DNA吸附柱置于新的1.5mL离心管中，向吸附柱柱膜中央上方小心加入50μL 溶液5(此步骤请谨慎操作，枪头请勿接触柱膜)，8,000 rpm离心30s，洗脱液即为DNA溶液。

　　注意：洗脱体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。DNA溶液请置于-20℃冰箱中保存，避免反复冻融。

　　【规格】 50次/盒

　　【贮藏及有效期】室温(15-25℃)保存，有效期12个月。

　　【批准文号】

　　【生产企业】广州悦洋生物技术有限公司【主要成分与含量】

序号	成分	含量
1	PCR反应A液	1管（0.75mL/管）
2	PCR反应B液	1管（0.25mL/管））
3	阴性对照	1管（0.5mL/管）
4	阳性对照	1管（0.5mL/管）
5	说明书	1份

　　【作用与用途】本试剂盒适用于猪血液、猪肉组织、淋巴结、脾脏等样本中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

　　【用法与判定】

　　1 用法

　　1.1 样品处理及模板准备

　　请利用商品化试剂盒提取核酸。

　　1.2 荧光PCR扩增

　　1.2.1 试剂准备

　　实验20分钟将试剂从冰箱取出并恢复至室温，使其融化，充分混匀后瞬时离心去除管壁吸附液体。

　　1.2.2 配制反应体系

　　按下表1体系，在配套PCR管中配制反应体系，盖紧管盖后瞬时离心10，转移至扩增区。

　　【注意事项】

　　(1)实验请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按步骤执行，不使用本试剂盒提供的组份或不按照说明书进行实验可能导致错误结果。

　　(2)所有试剂应在规定温度储存。-20℃保存的试剂在使用应充分混匀。试剂盒反复冻融次数不宜超过5次。

　　(3)实验操作应按照国家有关临床基因扩增实验室管理规范执行，实验过程应分区(试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区)，各区物品为用，不得交叉使用，避免污染。

　　(4)操作台、移液器、离心机等仪器用品应经常用1%次氯酸钠、75%乙醇或紫外灯进行消毒。耗材应进行无酶处理。

　　(5)待检样本、试剂盒组份及实验中的废弃物需按照具有潜在传染性物质处理方法进行处理。

　　(6)为防止荧光干扰，应避免使用含荧光物质的手套，避免用手直接接触，预防交叉污染。

　　(7)检测结果为阴性，并不代表为非感染状态，具体诊断需结合兽医临床。

　　(8)产生假阴性的可能原因为：待检样本在采集、运输、保存及核酸提取过程中操作不当造成DNA降解;样本中核酸浓度低于检测限;病毒待测靶基因出现变异;未经验证的其他干扰因素。

　　(9)产生假阳性的可能原因为：待检样本采集、运输及核酸提取过程中发生交叉污染。

　　【规格】 50反应/盒

　　【贮藏及有效期】试剂盒-20℃以下冷冻避光保存，有效期为12个月。

　　【批准文号】

　　【生产企业】广州悦洋生物技术有限公司

原创作者：山东万象环境科技有限公司

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